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花葉絡(luò)石的養(yǎng)殖方法

生長(zhǎng)與分化
1.無(wú)菌材料的獲得
選取一年生幼苗生長(zhǎng)??;仕無(wú)病蟲(chóng)害的母株,切取當(dāng)年萌發(fā)之春梢先端,去除葉片,保留葉柄,將枝條截成2—3cm的小段。消毒時(shí)先用10%洗衣粉溶液浸泡15min,然后用流水;中洗30min。在無(wú)菌條件下用75%乙醇溶液浸泡殺菌30 S, 用0.1%的升汞溶液加吐溫—20殺菌3、5、10、15min。0.1%升汞溶液滅菌效果隨殺菌時(shí)間延長(zhǎng)而提高,殺菌時(shí)間少于10min則無(wú)菌苗獲得率小于13.5%,殺菌15min”無(wú)菌苗獲得率為23.7%,外植體死亡率達(dá)33.3%。隨著殺菌時(shí)間的延長(zhǎng)升汞對(duì)植物材料的毒害作用加劇,以0.1%升汞溶液殺菌時(shí)間10—15min為宜。用無(wú)菌水;中洗3—5遍后,接種到MS固體培養(yǎng)基上。

2.芽的誘導(dǎo)
將接種后20d的無(wú)菌苗轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基(1)上,5—7d莖尖開(kāi)始萌動(dòng),10d腋芽萌動(dòng),芽逐漸長(zhǎng)大,繼續(xù)培養(yǎng)20d,莖段上所有腋芽均萌發(fā)成側(cè)枝。側(cè)枝生長(zhǎng)正常,葉片深綠色,莖基部愈傷組織較少,黃綠色。

3.試管苗的增殖
將試管苗側(cè)枝分割成2—3芽為一段,接種于培養(yǎng)基(2)上。10d后莖段葉芽萌動(dòng),30d長(zhǎng)成大量側(cè)枝,并有大量雙生枝和三生枝產(chǎn)生。接種莖段形成具有5—8側(cè)枝的叢生苗,平均增殖5.8倍。試管苗節(jié)間明顯伸長(zhǎng),幼嫩葉片莖桿均呈淡紅色,葉片大,莖桿較粗,組織不充實(shí),莖基部愈傷組織大。以后每30d繼代1次,經(jīng)3—4次繼代試管苗出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。

4.壯苗培養(yǎng)
將經(jīng)增殖培養(yǎng)的試管苗每繼代3—4次后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基(3)上。40d后形成大量側(cè)枝,平均每莖段4—6側(cè)枝,側(cè)枝平均長(zhǎng)1.8cm,平均增殖3.1倍?;緹o(wú)雙生枝或三生枝。側(cè)枝生長(zhǎng)??;D,組織充實(shí),葉色深綠,基部愈傷組織小,黃綠色,無(wú)玻璃化現(xiàn)象。

5.根的誘導(dǎo)
將生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)度大于1.2cm的側(cè)枝分割,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基(4)上。提高光照度至2500—3000lx,延長(zhǎng)光照時(shí)間至每天16h。培養(yǎng)15d后開(kāi)始有根原基形成,根原基形成后即可煉苗。20—25d調(diào)查生根情況,生根率73%,每苗平均生根l—2條。

6.煉苗移栽
將生根試管苗帶瓶移人栽培溫室,培養(yǎng)1周。當(dāng)根長(zhǎng)0.5—1 omb寸,打開(kāi)瓶蓋煉苗3—5d,將生根苗取出,洗凈根部培養(yǎng)基,栽植于育苗穴盤(pán)中。以黑泥碳為基質(zhì),溫度控制在20—25℃之間,濕度為85%—95%左右,20d即可成活,成活率達(dá)73%以上。
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